在重組蛋白表達時,我們常常通過將外源基因導入到細胞內(nèi),讓其隨著細胞蛋白的表達而表達,從而獲得目標蛋白的方式。這個過程,我們稱之為細胞轉染。細胞轉染的實現(xiàn)過程有很多,比如化學轉染法、物理轉染法、生物轉染法等等??梢哉f,細胞轉染是實現(xiàn)基因編輯、蛋白表達、信號傳導等一系列研究的重要方法。
細胞轉染現(xiàn)階段主要有兩種:穩(wěn)定轉染和瞬時轉染(關于穩(wěn)定轉染和瞬時轉染的相關知識以及穩(wěn)定細胞株構建的步驟,大家可以點擊“哺乳動物蛋白表達瞬時轉染與穩(wěn)定轉染之間有哪些不同?”查看)。
細胞轉染的常見問題有哪些?
1、哪些因素會影響到細胞的轉染率
質粒。質粒的選擇從直接上關系到轉染的效率,其濃度也會在極大程度上影響著轉染的效率(一般不要低于1000ng/uL);
細胞。首先要保證所選是一個活性較高的細胞,對于不同的細胞來說,轉染方法和試劑的選擇不同,轉染的效率也會存在極大的差異;
方法。按照說明書來選擇合適的轉染方法,并確定好最佳的轉染條件;
2、細胞轉染無法提高轉染率要怎么解決
當出現(xiàn)細胞轉染效率低的情況時,可以選通過構建穩(wěn)定細胞株的方式,或者通過藥物的加壓篩選來進行,這樣一般都能解決轉染效率低的情況;
3、怎么選擇合適的細胞轉染
目前常用的轉染方法主要有物理轉染法以及化學試劑等轉染方法,但是也各具優(yōu)缺點。比如物理轉染法需要使用到一些昂貴的儀器,一般的實驗室無法滿足這些要求;而化學轉染法使用相對更加廣泛,價格便宜、操作簡單,但是只能用于一些較為常規(guī)的細胞,對于一些個性化的細胞轉染效率則會相對低下;
細胞轉染作為外源基因的引入方式,可以說在直接上關系著蛋白表達的效率或成功率,可以說是蛋白表達成功的第一步。所以,如何選擇載體并構建好合適的轉染環(huán)境,在極大程度上制約著蛋白的表達。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。