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昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)

服務簡介

昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng) (BEVS) 是一種利用桿狀病毒作為外源基因的載體，通過感染昆蟲細胞或者昆蟲幼蟲來表達外源蛋白的系統(tǒng)，是重要的真核表達系統(tǒng)之一。

1.昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)的優(yōu)勢：

a.桿狀病毒安全性好

b.攜帶外源基因的容量大

c.外源目的蛋白質(zhì)表達水平高

d.表達的真核基因產(chǎn)品可以進行正確的折疊與修飾，因而具有良好的生物活性。

2.與哺乳細胞相比昆蟲表達系統(tǒng)的優(yōu)勢：

a.培養(yǎng)條件相對簡單，不需要CO2

b.不容易被細菌污染

c.能進行蛋白翻譯后糖基化修飾

d.大規(guī)模生產(chǎn)條件簡單，更易獲得大量蛋白

常見的表達載體及特征

載體 特征
pFastBac1

用于高水平蛋白表達的強AcMNPV多角體基因 (PH)啟動子

用于簡化克隆的大型多克隆站點
pFastBacHT

用于高水平蛋白表達的強多角體（PH）啟動子

用于使用金屬螯合樹脂純化重組融合蛋白的N端6His標簽，以及用于在蛋白純化后去除6His標簽的TEV蛋白酶裂解位點

用于簡化克隆的三個讀碼框的載體
pFastBacDual

用于同時表達兩種蛋白的兩個強桿狀病毒啟動子（PH 和 p10）

用于簡化克隆的兩個大型多克隆位點

 

常見的表達細胞及特征

細胞 來源 用途
Sf9 Sf9細胞系克隆分IPLBSF21-AE(Sf21)，來源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織

適于轉(zhuǎn)染、純化、生產(chǎn)高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白
Sf21

Sf21細胞衍生于IPLBSF-21細胞系，也來源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織

也適于轉(zhuǎn)染、純化、生產(chǎn)高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白。在一些結(jié)構(gòu)上Sf21細胞可能比Sf9細胞表達蛋白量高
Hi5

Hi5細胞系源于博伊斯湯普森研究所對植物的研究和源于白菜尺蠖卵巢細胞，粉紋夜蛾細胞

Hi5細胞表達重組病毒性能優(yōu)越, 經(jīng)常用于轉(zhuǎn)染和空斑純化，也適用于表達分泌型重組蛋白
S2

S2是一種果蠅晚期胚胎細胞。其中多為雌性四倍體細胞，也有雙倍體細胞

比較適合重組蛋白的表達

 

服務優(yōu)勢

1.普健生物利用經(jīng)典Bac-to-Bac技術(shù)，打造了一個快速簡便高效的桿狀病毒表達平臺; 該技術(shù)能夠快速地產(chǎn)生重組病毒，而且不需要繁瑣的空斑分析，大大提高了效率。

2.蛋白生產(chǎn)的周期短，通量大?？梢詫崿F(xiàn)細胞從小規(guī)模培養(yǎng)到大規(guī)模發(fā)酵的過程，使得蛋白產(chǎn)物甚至可以達到100mg/L的級別。

3.提供免費的病毒粒子擴增和儲存服務，儲存期長達2年。

服務內(nèi)容

服務項目

客戶提供

服務內(nèi)容

服務周期

交付內(nèi)容

昆蟲桿狀病毒表達蛋白

基因序列

載體

基因合成及密碼子優(yōu)化

載體構(gòu)建

病毒包裝及擴增

表達純化測試

放大生產(chǎn)及純化

服務報告

6-8 周

蛋白樣品

技術(shù)服務報告

案例展示

案例1 昆蟲-桿狀病毒系統(tǒng)表達大蛋白A(272 KD)

　　普健采用昆蟲-桿狀病毒表達系統(tǒng)，C端融合6*His標簽表達了大小為272 KD的蛋白A，經(jīng)過P1代表達測試，病毒擴增后分別轉(zhuǎn)染Sf細胞和Tn細胞測定MOI，選取最佳表達條件進行P2代表達測試和200ml表達純化，最終得到的蛋白A純度90%，產(chǎn)量5mg/L。

圖1 蛋白A P1代表達純化測試結(jié)果( 還原SDS-PAGE )
A.考馬斯亮藍染色. B. WB (ECL發(fā)光，抗His標簽抗體).
ø.陰性對照培養(yǎng)基. 1 和 2.轉(zhuǎn)染的 1和2號克隆. Medium:培養(yǎng)基. NPE. 可溶上清. DPE. 沉淀. +. 陽性對照.

 

圖2.蛋白A 在Sf 和 Tn 細胞中的P2 代表達測試(還原 SDS-PAGE).
考馬斯亮藍染色 Ø.陰性對照. D2-D3. 轉(zhuǎn)染后天數(shù). +. 陽性對照.

 

圖3.蛋白A 在Sf 和 Tn 細胞中的P2 代表達測試情況-WB驗證(還原 SDS-PAGE ).
Ø.陰性對照. D2-D3. 轉(zhuǎn)染后天數(shù). +. 陽性對照.

 

圖4.蛋白A純化質(zhì)檢圖(還原 SDS-PAGE )
A.考馬斯亮藍染色. B. WB (ECL發(fā)光;抗His標簽抗體). MW. 分子量標記.

 

案例2 昆蟲-桿狀病毒系統(tǒng)表達G蛋白偶聯(lián)受體(蛋白B)

　　普健生物采用昆蟲-桿狀病毒表達系統(tǒng)，N端融合10*His和Flag標簽表達了大小為42 KD的G蛋白偶聯(lián)受體-蛋白B(7次跨膜區(qū)，2個糖基化位點)，經(jīng)過P1代表達測試，病毒擴增后分別轉(zhuǎn)染Sf細胞和Tn細胞測定MOI，選取最佳表達條件進行P2代表達測試和200 ml表達純化，最終得到的蛋白B用biacore測定了跟配體的親和力，親和力在uM級。

圖1.蛋白B P2代表達純化測試（Sf和Tn細胞）.
還原SDS-PAGE及考馬斯藍染色.
Ø.陰性對照.D2-D3.感染后天數(shù).
Medium:培養(yǎng)基.NPE.可溶性上清.DPE.沉淀.

 

圖2 P2代表達測試WB驗證(Sf和Tn細胞；ECL發(fā)光法；抗His標簽抗體).
Ø.陰性對照. D2-D3.感染后天數(shù).+.陽性對照.Medium:培養(yǎng)基.NPE.可溶性上清.DPE.沉淀.

 

圖3 蛋白B純化質(zhì)檢圖（還原SDS-PAGE；考馬斯藍染色）
MW.分子量標記.

 

圖4. 蛋白B跟配體親和力測定結(jié)果

優(yōu)勢服務