噬菌體展示抗體技術(shù)將基因型和表型統(tǒng)一于一體，將選擇能力與擴(kuò)增能力結(jié)合起來，具有強(qiáng)大的篩選能力，能夠在體外模擬體內(nèi)的抗體生成過程，可以不經(jīng)雜交瘤途徑，甚至不經(jīng)過免疫就可以制備和生產(chǎn)單克隆抗體。

噬菌體展示技術(shù)的出現(xiàn)為全人重組抗體提供了一條簡便、快捷的基因工程抗體制備路線，是全人重組抗體制備發(fā)展史上重要的轉(zhuǎn)折點。

近年來，單域抗體(SdAb)的關(guān)注度也非常高，單域抗體為駝類和軟骨魚類中天然存在的僅由兩條重鏈組成的特殊抗體，只包含一個重鏈可變區(qū)(VHH, Variable Domain of Heavy Chain Antibody)和兩個常規(guī)的CH2與CH3區(qū)。單域抗體通過重鏈上的一個可變區(qū)(VHH)結(jié)合抗原，該可變區(qū)可以單獨穩(wěn)定地在體外存在，被稱為駝類單域抗體(SdAb)或者納米抗體(nanobody)。納米抗體晶體寬為2.5nm，長4nm，分子量僅為傳統(tǒng)完整抗體的1/10(約15kD)但依然具有完整的抗原識別能力，得益于納米抗體微小的結(jié)構(gòu)、完整的抗原識別能力以及噬菌體篩選技術(shù)，納米抗體表現(xiàn)出高親和力、高特異性、強(qiáng)穿透性和易于改造和表達(dá)等特點，并且由于可以獲得抗體完整序列，納米抗體可以通過體外重組表達(dá)高質(zhì)量穩(wěn)定生產(chǎn)，有效避免傳統(tǒng)抗體的批次間差異問題。

納米抗體特點

1.有更長的CDR3區(qū)(納米抗體CDR3通常由16~24個氨基酸組成，傳統(tǒng)單抗CDR3僅有7~12個氨基酸 )，與抗原特異性結(jié)合能力更強(qiáng)

2.結(jié)構(gòu)簡單，易于基因工程改造

3.制備簡單，易于工業(yè)化放大生產(chǎn)

4.易于人源化

噬菌體抗體庫的分類

抗體庫是編碼特性未知抗體的抗體基因的巨大集合(通常大于10¹⁰)?？贵w庫是通過噬菌體展示和其他體外選擇技術(shù)來發(fā)現(xiàn)抗體的重要來源，其設(shè)計是成功發(fā)現(xiàn)抗體的關(guān)鍵。

隨機(jī)肽庫：將化學(xué)合成的隨機(jī)寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白基因融合，在噬菌體表面表達(dá)出各種氨基酸組合的隨機(jī)序列短肽。利用噬菌體展示隨機(jī)肽庫可以高通量篩選各種抗原的抗原表位

免疫庫：免疫庫由經(jīng)過免疫 ( 包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、腫瘤等 ) 后的供體B淋巴細(xì)胞的抗體基因構(gòu)建。對于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高，但一般僅適用于一種特異性抗體的選擇，庫容量要求不高，一般10⁶-10⁸的庫容量就可滿足需要

天然庫：采用不經(jīng)免疫的人或動物來源的外周血淋巴細(xì)胞、骨髓、脾細(xì)胞的B細(xì)胞作為材料，進(jìn)行基因擴(kuò)增，但親和力通常較低。骨髓內(nèi)和骨髓外所有抗體基因都包含在內(nèi)，所構(gòu)建的抗體庫適用于所有抗原所對應(yīng)的抗體的選擇，庫容量要求較高，最小需要達(dá)到10⁹，因為目前估算的自然界的抗原種類在這個數(shù)量級上

1.豐富的噬菌體抗體技術(shù)經(jīng)驗，5年以上噬菌體抗體開發(fā)，交付上百個噬菌體展示抗體開發(fā)項目

2.具有全人源重組抗體庫，庫容高達(dá)千億級別(10¹¹ pfu)，兩步建庫法，保證了文庫的多樣性，抗體庫片段插入正確率高;可以兩周拿到全人源重組抗體

3.可以構(gòu)建多物種(人源、小鼠、兔子、羊駝等)抗體文庫

4.可以構(gòu)建多種類型(scfv、Fab、VHH 等)的抗體文庫

服務(wù)流程

根據(jù)文庫中數(shù)百個隨機(jī)抗體序列分析，其CDR3長度基本符合正態(tài)分布，跟文獻(xiàn)中報道的自然VHH抗體CDR3長度分布相符。

挑選背景值較低的抗體蛋白進(jìn)行親和力測定，結(jié)果如下：