大腸桿菌是第一個(gè)用于蛋白生產(chǎn)的宿主菌,因?yàn)樗倪z傳背景清晰,培養(yǎng)操作的過(guò)程簡(jiǎn)單,而且引起它轉(zhuǎn)化快、傳導(dǎo)效率高、生長(zhǎng)快等優(yōu)點(diǎn),最主要的是因?yàn)槠涑杀镜土沟闷鋸V泛地使用與蛋白制備上。而且因?yàn)槠涞鞍妆磉_(dá)要遠(yuǎn)高于其他基因表達(dá)系統(tǒng),使得其成為使用最為廣泛的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。
那么,大腸桿菌蛋白表達(dá)的組成是什么呢?
1、表達(dá)載體
直接通過(guò)載體來(lái)進(jìn)行蛋白表達(dá)。我們知道,完整的載體必須有復(fù)制的起點(diǎn)、啟動(dòng)子、插入基因、篩選標(biāo)記和終止子。所以,我們只需要根據(jù)蛋白生成的環(huán)境對(duì)其進(jìn)行表達(dá),或者通過(guò)在目的蛋白的N端或C端加入特殊序列,促進(jìn)蛋白的可溶性和正確折疊;
2.外源基因
在大腸桿菌表達(dá)體系中要表達(dá)的基因即外源基因,包括原核基因和真核基因;原核基因可以在大腸桿菌中直接表達(dá)出來(lái),但是真核基因韓有內(nèi)含子不能,大腸桿菌不能對(duì)mRNA進(jìn)行剪切,從而形成成熟的mRNA,所以真核基因一般以cDNA的形式在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)。此外還需提供大腸桿菌能識(shí)別的且能轉(zhuǎn)錄翻譯真核基因的元件。
3、表達(dá)宿主菌
直接采用大腸桿菌來(lái)進(jìn)行蛋白表達(dá)。當(dāng)然了,宿主菌的選擇需要基于宿主細(xì)菌的特性和靶蛋白的特征來(lái)進(jìn)行。