桿狀病毒昆蟲表達系統(tǒng)是現(xiàn)如今使用最為廣泛的表達系統(tǒng)之一,其不僅能有效提升蛋白表達效率,而且安全性好,具備良好的生物活性。而且因為其通過感染昆蟲細胞或幼蟲來表達外源蛋白,所以不會對哺乳動物產(chǎn)生任何致病性,因此,自誕生以來,就得到了廣泛的應用。那么,桿狀病毒昆蟲表達系統(tǒng)的具體涉及理念及其構建方法是怎樣的呢?下面,普健生物就和大家具體聊聊。
桿狀病毒昆蟲表達系統(tǒng)的設計理念是怎樣的?
其實和哺乳動物表達系統(tǒng)一樣,桿狀病毒昆蟲表達系統(tǒng)也是通過將外源基因通過剪切、對接等方式,將外源基因加入到昆蟲細胞中,而后讓目的蛋白隨著昆蟲細胞的表達而表達。之后再通過蛋白析出、純化等一系列的操作,最終獲得我們所需蛋白的方式。
桿狀病毒昆蟲表達系統(tǒng)的構建方法是怎樣的?
和哺乳動物表達系統(tǒng)不同,桿狀病毒昆蟲表達系統(tǒng)主要分為兩種:在昆蟲細胞內(nèi)重組和在昆蟲細胞外重組。
在昆蟲細胞內(nèi)重組:
最早期常用這個方法,通過將未加修飾的野生病毒進行重組,后來發(fā)展成采用線性化的病毒DNA替代,將其與轉染載體進行昆蟲細胞共轉染時,只要不發(fā)生同源重組,那么,重組率則會高達100%;
而后,大家對這個方法進行了改良,比如直接克隆等方法,不僅能避免大腸桿菌內(nèi)的重組,也能有效加速重組的過程。
在昆蟲細胞外重組:
通過將外源基因重組到病毒基因中去 ,而且只用重組桿狀病毒DNA去轉染昆蟲細胞。當然了,隨著技術的發(fā)展,有科協(xié)家利用噬菌體編碼重組酶,讓其提高重組效率,而后在通過染色等手段進行重組體的鑒定等;
總的來說,桿狀病毒昆蟲表達系統(tǒng)在一定程度上解決了其他表達系統(tǒng)的不足之處,無論在方法還是在制備成本上都有著一定的優(yōu)勢,但是也有著一定的不同。不過,我們相信,隨著技術的不斷發(fā)展,在后期其一定會得到更好的利用。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。