原核蛋白表達(dá)是現(xiàn)階段較為常用的蛋白表達(dá)方式之一，因?yàn)槠溥z傳背景清晰、細(xì)胞增殖快、蛋白表達(dá)量高、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，使得其在蛋白表達(dá)中極為常用。但是，很多人在采用原核蛋白棒表達(dá)的時(shí)候，常常會(huì)出現(xiàn)蛋白無(wú)法表達(dá)的情況。有鑒于此，普健生物在這里和大家聊聊有關(guān)原核蛋白表達(dá)中常見(jiàn)的幾大問(wèn)題。

　　1、不知道蛋白的特性及其結(jié)構(gòu)

　　當(dāng)我們不知道蛋白結(jié)構(gòu)和特性的時(shí)候，我們可以先確定一下這個(gè)蛋白是否有人研究過(guò)，是不是新發(fā)現(xiàn)的蛋白。如果有人研究過(guò)，則可以直接查詢(xún)相關(guān)文獻(xiàn)，而后采用軟件來(lái)測(cè)序。如果沒(méi)人研究過(guò)，則可以考慮先測(cè)試部分氨基酸，而后再設(shè)計(jì)引物克隆;

　　2、如何選擇宿主菌

　　原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)的密碼子偏愛(ài)性不同，所以，不能直接用真核表達(dá)的密碼子。如果蛋白不表達(dá)，則可能是因?yàn)榈鞍诪槎镜鞍祝蛐蛄兄杏邢∮忻艽a子;

　　3、測(cè)序正確但是蛋白無(wú)法表達(dá)

　　解析一下稀有密碼子，如果較多，則需要采取其他辦法。也可能是基因本身的問(wèn)題，或者表達(dá)量過(guò)低的情況;

　　4、細(xì)胞為什么會(huì)停止生長(zhǎng)

　　通常情況下，如果細(xì)胞停止生長(zhǎng)，那么可能就會(huì)造成克隆能力大大降低，但是卻不會(huì)死亡。我們可以用菌落的形成來(lái)檢測(cè)表達(dá)系統(tǒng)的性能;

　　5、表達(dá)量和可溶性低的原因

　　一般來(lái)說(shuō)，原核表達(dá)和可溶性的不同和很多方面有著關(guān)系，比如蛋白合成速率、密碼子優(yōu)化、表達(dá)溫度以及誘導(dǎo)條件優(yōu)化等，只有做好這些方面的工作，才能更好的促進(jìn)蛋白的表達(dá)和可溶性;

　　當(dāng)然了，在原核蛋白表達(dá)過(guò)程中可能會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，相對(duì)來(lái)說(shuō)，都是因?yàn)槿粘２僮髦械囊恍┘?xì)節(jié)操作方面的問(wèn)題，一般只要注意到了，問(wèn)題都不會(huì)很大。而且在原核表達(dá)中控制好相應(yīng)的外部環(huán)境問(wèn)題，能夠在更大程度上保證蛋白的表達(dá)。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。