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采用雜交瘤技術制備抗體的原理及其具體過程

發(fā)表時間:2023-10-10 訪問次數(shù):841

  雜交瘤技術也叫做單克隆抗體技術,它是一種在細胞融合技術上發(fā)展起來的抗體制備技術。雜交瘤細胞技術通過將骨髓瘤細胞與免疫的動物脾細胞相融合,從而形成能夠無限增殖且可以生產(chǎn)單克隆抗體的細胞。那么,您對雜交瘤細胞抗體制備技術了解多少呢?今天普健生物在這里和大家具體聊聊。

  雜交瘤細胞制備的主要步驟:

  1、細胞的選擇與細胞融合

  特異性抗體制備的一方必須是免疫后的B細胞,通常情況下,我們都會選擇面以后的動物脾細胞,因為脾是B細胞的主要匯聚場所,只要發(fā)生免疫反應,脾臟中就一定會出現(xiàn)免疫應答。融合細胞的另外一方通常選擇骨髓瘤細胞,因為需要其擁有不斷繁殖的特性。

  通常情況下,我們都會選擇細胞融合劑來進行細胞的融合,它會對細胞膜造成一定的損傷,也使得細胞更加容易粘連在一起。一般來說,我們會選擇聚乙二醇來充當細胞融合劑,在40%的濃度下,其能夠最低程度上對細胞造成損傷,同時又能產(chǎn)生最高頻的融合;

  2、細胞培養(yǎng)

  細胞融合是一個物理過程,在融合的過程中會出現(xiàn)呈現(xiàn)出各種樣式,比如脾-瘤細胞、脾-脾細胞、瘤-瘤細胞等。但是,正常的脾細胞在培養(yǎng)基中僅能存活5-7天,細胞多聚體也容易死去,所以,我們僅需將瘤細胞去除即可。而后,在對剩余的細胞進行培養(yǎng),以獲得我們所需細胞;

  3、特異性抗體篩選

  因為細胞的融合是一個隨機的過程,所以,我們需要有針對性地對其進行篩選清除。一般來說,篩選分為兩步:第一步是對融合細胞的抗體進行篩選,第二步是對抗體進行特異性篩選。一般來說,我們可以對融合細胞進行稀釋,均勻分為到培養(yǎng)板的每個孔中,培養(yǎng)后取上清液用ELISA法選出高分泌性的細胞(也就是我們常說的克隆)。而后,對這些細胞再次進行克隆化,找出其中陽性細胞株,擴增后再進行凍存、培養(yǎng)等操作;

  當然了,雜交瘤細胞抗體篩選的過程更加地復雜,而且其中涉及到很多精細化操作,需要專業(yè)技術的人員進行操作。而且有很多細節(jié)方面的工作需要引起注意,否則,很容易造成雜交瘤細胞融合不成功的現(xiàn)象。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供雜交瘤細胞抗體制備服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。