蛋白表達(dá)的重要性我們就不在這里一一贅述了,就我們所知的抗體其實(shí)也是蛋白之一,所以,做好蛋白就標(biāo)志著我們能否做好各種蛋白抗體產(chǎn)品。蛋白生產(chǎn)的過程其實(shí)不困難,其實(shí)就是將需要表達(dá)的片段添加到DNA中,成成nRNA,然后表達(dá)出需要的蛋白產(chǎn)品。說起來簡單,但是做起來非常的困難。下面,普健生物就和大家具體聊聊蛋白的表達(dá)過程。
蛋白的合成過程看起來并不困難,其實(shí)就是從DNA到mRNA,表達(dá)出來,就是蛋白了。
一般的操作流程如下:
1、克隆或合成目的基因
2、構(gòu)建載體
3、蛋白表達(dá)、純化及檢驗(yàn)
4、大量表達(dá)
表達(dá)系統(tǒng)操作的詳細(xì)步驟和所需時(shí)間:
1、基因合成及密碼子優(yōu)化(一般需要耗時(shí)1-2周);
2、載體構(gòu)建。我們需要將目標(biāo)DNA克隆至表達(dá)載體上,然后對質(zhì)粒進(jìn)行測序,測序合格后,再進(jìn)行大量質(zhì)粒的制備(一般這個(gè)過程需要持續(xù)1-2周);
3、瞬時(shí)表達(dá)評估。主要進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)及表達(dá)水平檢測(通常需要耗時(shí)2周);
4、穩(wěn)定細(xì)胞株開發(fā)。主要進(jìn)行細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及篩選,MTX擴(kuò)增及篩選,細(xì)胞建庫等工作(一般來說需要耗時(shí)12-20周);
5、大量表達(dá)。在如上的過程正常實(shí)現(xiàn)后,將細(xì)胞投入大量生產(chǎn),并對其進(jìn)行純化工作(一般耗時(shí)2-3周);
總的說來,蛋白表達(dá)的過程其實(shí)并不顯得特別的困難,相比單克隆抗體的制備過程來說,也不那么繁瑣,但是,如果不注意相應(yīng)的細(xì)節(jié)問題,依然容易出現(xiàn)失敗的情況。所以,在日常制備單邊的過程中,我們需要注意到一些細(xì)節(jié)方面的問題。普健生物為您提供專業(yè)的蛋白制備服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。