在重組蛋白表達中，很多時候會出現(xiàn)因為一些原因或是誤操作導致蛋白表達失敗或蛋白性能達不到要求的情況。很多時候是因為一些細節(jié)操作方面的問題，有些時候是因為重組蛋白設(shè)計方面的問題，那么，到底是因為什么原因?qū)е履?有鑒于此，普健生物今天在這里和大家具體盤點一下有關(guān)重組蛋白表達過程中的一些常見問題。

　　1、蛋白表達水平低

　　重組蛋白表達水平低可以說是重組蛋白系列中最常見的一個問題，因為蛋白人為干預程度較高，無法完全按照傳統(tǒng)蛋白表達條件進行表達。引起這個情況的原因很多，比如啟動子活性不足、轉(zhuǎn)錄過程阻塞、翻譯后修飾限制多等等。需要通過優(yōu)化啟動子、培養(yǎng)條件、轉(zhuǎn)化條件、培養(yǎng)時間等多方面進行綜合考慮;

　　2、目的蛋白形成包涵體

　　非天然蛋白會出現(xiàn)包涵體的情況也是重組蛋白表達過程中非常常見的問題。當形成包涵體時，我們可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件、引入輔助蛋白等方式來解決這個問題;

　　3、目標蛋白磷酸化或糖基化不足

　　重組蛋白在表達后常常需要對其進行翻譯后修飾的操作(比如糖基化和磷酸化)，但是有的時候因為修飾程度不足，導致蛋白在功能和穩(wěn)定性方面受到影響。我們可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件、引入合適的修飾基因以及選擇更好的進化系統(tǒng)來解決問題;

　　4、目標蛋白折疊和穩(wěn)定性方面的問題

　　目的蛋白折疊錯誤很容易出現(xiàn)蛋白失活或不穩(wěn)定的現(xiàn)象，這個時候我們需要優(yōu)化載體構(gòu)建以及純化策略的方式來解決問題;

　　5、目標蛋白可溶性問題

　　蛋白不可溶或可溶性低也是重組蛋白表達的常見問題，主要表現(xiàn)在保存時出現(xiàn)聚集和結(jié)晶方面的問題。我們可以通過優(yōu)化純化條件、使用功能蛋白穩(wěn)定劑以及使蛋白緩慢結(jié)晶的方式來解決這個問題;

　　重組蛋白表達在蛋白功能研究和醫(yī)藥生產(chǎn)方面有著重要的意義，但是也因為其非天然蛋白的緣故，會遇到很多傳統(tǒng)蛋白表達所不會遇到的問題，哺乳表達量低、包涵體形成等。這個時候，我們就需要通過優(yōu)化各種條件來滿足其表達的條件，這樣才能獲得質(zhì)量更好的蛋白。當然了，各個細節(jié)方面的操作也是非常重要的。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。